PCR (بحث) - تطبيق. ما هي تقنية PCR؟

PCR هو اختبار تم استخدامه في تشخيص العديد من الأمراض. تسمح طريقة تفاعل البوليميراز المتسلسل بإظهار الوجود المباشر للبكتيريا في الكائن الحي ، وخاصة الحمض النووي الخاص به. يستخدم اختبار PCR ، من بين أمور أخرى في تشخيص مرض لايم. ما هي تقنية PCR؟ ما هو الوقت الحقيقي PCR؟

جدول المحتويات:

1. PCR (اختبار) - ما هي تقنية PCR؟
2. PCR (بحث) - تطبيق طريقة PCR
3. PCR (بحث) - مرض لايم
4. PCR (بحث) - النتائج. هل يمكن أن تكون ايجابيات كاذبة؟
5. PCR (بحث) - النتائج. هل يمكن أن تكون سلبية كاذبة

PCR (تفاعل البلمرة المتسلسل) هي الطريقة الأساسية المستخدمة في المختبرات الجينية والجزيئية. تم تطويره في عام 1983 من قبل كارا موليس ، التي حصلت على جائزة نوبل في عام 1993 عن ذلك.

اسمع ما هي تقنية PCR. هذه مادة من دورة LISTENING GOOD. بودكاست مع نصائح.

لعرض هذا الفيديو ، يرجى تمكين JavaScript ، والنظر في الترقية إلى متصفح ويب يدعم فيديو

PCR (اختبار) - ما هي تقنية PCR؟

يتكون اختبار PCR من تضخيم متعدد (عادة في 30-40 دورة) لجزء معين من الحمض النووي ، على سبيل المثال الجينات التي تشفر بروتينات بوريليا ، باستخدام إنزيم البوليميراز.

بعد ذلك ، يتم استخدام أصباغ جزيئية خاصة لجعل جزء الحمض النووي المتضخم مرئيًا. يعد تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) ، بسبب تضخيم أجزاء معينة من الحمض النووي ، طريقة فائقة الحساسية.

في طريقة PCR ، يتم تضخيم شظايا الحمض النووي باستخدام أزواج بادئة محددة لمنطقة معينة من الحمض النووي البكتيري. على سبيل المثال ، المناطق المستهدفة في تفاعل البوليميراز المتسلسل المستخدمة في تشخيص داء لايم هي جينات تشفر البروتينات ، على سبيل المثال 16S rDNA، recA، fla، p66، OspA.

المادة البيولوجية التي يمكن من خلالها إجراء الاختبار هي:

• دم
• جزء من الجلد من حمامي مهاجرة
• السائل النخاعي
• السائل الزليلي أو من الغضروف المفصلي
• بول

PCR (بحث) - تطبيق طريقة PCR

بالإضافة إلى تشخيص داء لايم باستخدام طريقة تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) ، من الممكن الكشف عن أجزاء معينة من الحمض النووي للكائنات الدقيقة الأخرى أو البشر. لذلك ، تُستخدم طريقة PCR أيضًا في:

• تشخيص ومراقبة الالتهابات الفيروسية: فيروسات الهربس (فيروس الهربس ، فيروس الهربس النطاقي ، إبشتاين بار ، الفيروس المضخم للخلايا) ، فيروس نقص المناعة البشرية ، فيروسات التهاب الكبد (HBV و HCV)
• تشخيص ومراقبة الالتهابات البكتيرية ، خاصة تلك البكتيريا التي لا يمكن التعرف عليها من خلال الزراعة ، مثل السل
• تشخيص ومتابعة أمراض الأورام: اللوكيميا ، سرطان الثدي ، سرطان القولون والمستقيم ، سرطان الرئة
• تشخيص الاستعداد للسرطان: سرطان الثدي والمبيض (جينات BRCA1 و BRCA2) وسرطان القولون والمستقيم (جينات APC و CHEK2)
• تشخيص الأمراض الوراثية: داء ترسب الأصبغة الدموية (جين HFE) ، الثلاسيميا (جينات HBA1 و HBA2) ، مرض الاضطرابات الهضمية (جينات HLA)
• اختبارات الأبوة ، والتي تكشف عن توافق الحمض النووي للطفل والأب

اقرأ أيضًا: اختبارات مرض لايم - كيف تبدو وما هو سعر اختبارات مرض لايم اختبار ويسترن بلوت ومرض لايم. تفسير نتائج الاختبار الأمراض التي تنقلها القراد: مرض لايم وداء البابيزيا وداء البارتونيلات وداء TBE وغيرها.

حاليًا ، هناك العديد من التعديلات على طريقة PCR. على سبيل المثال ، في تشخيص داء لايم ، يتم استخدام طرق PCR المتداخلة و PCR في الوقت الحقيقي بشكل أساسي. هذا الأخير هو طريقة كمية ويسمح بتحديد العدد الدقيق لنسخ Borrelia DNA في المواد البيولوجية المختبرة.

PCR (البحث) ومرض لايم

الاختبارات المصلية هي أساس تشخيص مرض لايم. ومع ذلك ، هناك حالات إكلينيكية قد تتسبب في أن تكون هذه الاختبارات سلبية كاذبة:

• النافذة المصلية ، أي الفترة الأولية للعدوى التي لا ينتج فيها الجسم بعد أجسامًا مضادة IgM و IgG محددة ضد Borrelia spirochetes
• في الأشخاص الذين يعانون من نقص المناعة الذين لا ينتجون ما يكفي من الأجسام المضادة
• وجود مجمعات مناعية تتكون من مستضدات Borrelia spirochetes وأجسام مضادة محددة لها وتمنع اكتشاف الأجسام المضادة بالطرق المصلية

إذا اشتبه المريض في ظهور أعراض مرض لايم وكانت نتائج الاختبار المصلي سلبية ، يمكن إجراء الاختبارات الجزيئية على أساس طريقة تفاعل البوليميراز المتسلسل.

يمكن الكشف عن DNA لبوريليا اللولبية في المرحلة المبكرة من العدوى ، حيث يكون عدد اللولبيات في سوائل الجسم هو الأعلى.

في تشخيص داء لايم ، يتم استخدام الطرق المصلية مثل ELISA بشكل أساسي ، ولكن في بعض الحالات السريرية ، تكون الاختبارات الجينية باستخدام طريقة PCR مفيدة.

كلما طالت فترة العدوى ، قل احتمال اكتشاف الحمض النووي البكتيري. لذلك ، في بعض الحالات ، قبل إجراء اختبار تفاعل البوليميراز المتسلسل ، تنمو البكتيريا على وسط خاص لمدة أسبوع إلى أسبوعين ثم يتم إجراء الاختبار.

يستخدم هذا النهج في حالة الاشتباه بمرض لايم والسائل الدماغي النخاعي. في المرحلة المتأخرة من العدوى ، يكون من الأنسب إجراء اختبار ELISA.

لا ينبغي استخدام طريقة تفاعل البوليميراز المتسلسل في التشخيص الروتيني لمرض لايم بسبب الافتقار إلى التوحيد القياسي فيما يتعلق بحدوث أصناف بوريليا بورجدورفيري في بولندا.

ومع ذلك ، في حالة وجود صعوبات في التشخيص (خاصة في المرحلة المبكرة من المرض) ، تساعد نتيجة اختبار PCR في عملية التشخيص.

تعني نتيجة الاختبار الإيجابية أنه تم الكشف عن وجود DNA Borrelia burgdorferi وأنواعه في المادة المختبرة ، ولكنها لا توضح ما إذا كانت العدوى النشطة تحدث في الجسم. من ناحية أخرى ، النتيجة السلبية لا تستبعد وجود البكتيريا في الجسم.

تقدم بعض المعامل اختبارات لوجود DNA Borrelia في القراد. ومع ذلك ، فإن نتيجة هذا الفحص ليست هي الأساس لتشخيص مرض لايم في الشخص المصاب.

مقال موصى به:

اختبار ELISA - ماذا يكتشف؟ كيف تقرأ النتائج؟ سعر الاختبار

PCR - النتائج. هل يمكن أن تكون ايجابيات كاذبة؟

يعتبر تفاعل البوليميراز المتسلسل طريقة شديدة الحساسية وفي نفس الوقت حساسة للغاية للتلوث. لذلك ، من المهم جدًا في الاختبارات القائمة على PCR تحديد ضوابط داخلية مناسبة لاستبعاد الإيجابيات الخاطئة.

المفتاح هو أيضًا المجموعة الصحيحة من المواد للاختبار بالإضافة إلى خبرة وموثوقية الطبيب التشخيص الذي يقوم بإجراء الاختبار.

PCR - النتائج. هل يمكن أن تكون سلبية كاذبة

كما هو الحال في أي اختبار معمل ، أيضًا في طريقة PCR ، قد تظهر نتائج سلبية خاطئة. من المهم هنا جمع الدم للحصول على مضاد تخثر مناسب ، لأن بعضًا منها ، مثل الهيبارين ، يمكن أن يثبط تفاعل تفاعل البوليميراز المتسلسل.

أيضًا ، قد يؤدي جمع المادة بعد بدء العلاج بالمضادات الحيوية إلى انخفاض كفاءة تفاعل تفاعل البوليميراز المتسلسل وزيادة احتمال حدوث نتائج سلبية خاطئة.

يجب أن نتذكر أيضًا أن بكتيريا Borrelia تعيش لفترة قصيرة جدًا في الدم وسوائل الجسم ، لأنها بفضل المستقبلات الخاصة تخترق بسرعة كبيرة في الأماكن "التي يصعب الوصول إليها" في الجسم.

لذلك ، على عكس تشخيص الكائنات الحية الدقيقة الأخرى ، فإن عدد Borrelia spirochetes في المواد البيولوجية صغير ، وأحيانًا حتى عند حد اكتشاف طريقة PCR. يمكن أن يسبب هذا أيضًا نتيجة سلبية خاطئة.

مقال موصى به:

اختبار تحول الخلايا الليمفاوية (LTT)

المؤلفات

1. Dunaj J. et al. أهمية طريقة تفاعل البوليميراز المتسلسل في تشخيص داء لايم. تصفح إبيديميول. 2013 ، 67 ، 119-123.
2. التشخيص المختبري للأمراض التي تنقلها القراد. توصيات الفريق العامل: الغرفة الوطنية لأخصائيي التشخيص المخبري ، المعهد الوطني للصحة العامة - المعهد الوطني للصحة ، مستشار وطني في مجال الأمراض المعدية ، قسم الأمراض المعدية والعدوى العصبية ، جامعة بياليستوك الطبية ، الجمعية البولندية لعلم الفيروسات ، وارسو 2014.
3. Ružić-Sabljić E. و Cerar T. التقدم في التشخيص الجزيئي لمرض لايم. خبير القس مول التشخيص. 2017 يناير ؛ 17 (1): 19-30.
4. Valones M.A. وآخرون. مبادئ وتطبيقات تفاعل البلمرة المتسلسل في مجالات التشخيص الطبي: مراجعة. Braz J ميكروبيول. 2009 يناير-مارس 40 (1): 1-11.

عن المؤلف

كارولينا كارابين ، دكتوراه في الطب ، دكتوراه ، عالمة الأحياء الجزيئية ، تشخيص المختبر ، Cambridge Diagnostics Polska تدربت كعالمة أحياء مع تخصص في علم الأحياء الدقيقة والتشخيص المخبري مع أكثر من 10 سنوات من الخبرة في العمل المخبري. خريج كلية الطب الجزيئي وعضو في الجمعية البولندية لعلم الوراثة البشرية. رئيس المنح البحثية في مختبر التشخيص الجزيئي في قسم أمراض الدم والأورام والأمراض الباطنية في جامعة وارسو الطبية. دافعت عن لقب دكتور في العلوم الطبية في مجال البيولوجيا الطبية في كلية الطب الأولى في جامعة الطب في وارسو. مؤلف للعديد من العلوم العلمية والشعبية يعمل في مجال التشخيص المختبري والبيولوجيا الجزيئية والتغذية. بشكل يومي ، بصفته متخصصًا في مجال التشخيص المختبري ، يدير القسم الفني في Cambridge Diagnostics Polska ويتعاون مع فريق من خبراء التغذية في عيادة CD الغذائية. يشارك معرفته العملية في التشخيص والعلاج الغذائي للأمراض مع المتخصصين في المؤتمرات والجلسات التدريبية والمجلات والمواقع الإلكترونية. وهي مهتمة بشكل خاص بتأثير نمط الحياة الحديث على العمليات الجزيئية في الجسم.