اختبار ELISA - ماذا يكتشف؟ كيف تقرأ النتائج؟ سعر الاختبار

يكشف اختبار ELISA عن العديد من الأمراض ، ولهذا السبب وجد تطبيقًا واسعًا في الطب وأكثر من ذلك. ومع ذلك ، فإن اختبار ELISA معروف بتشخيصه لمرض لايم. ما هو اختبار ELISA؟ كيف نفسر النتائج؟ ما هو سعر الاختبار؟

جدول المحتويات:

1. اختبار ELISA - ماذا يكتشف؟ تطبيق اختبار ELISA
2. اختبار ELISA - ما هو الاختبار؟
3. اختبار ELISA ومرض لايم - متى يتم إجراء الاختبار؟
4. اختبار ELISA - السعر. كم تكلفة اختبار ELISA؟
5. اختبار ELISA - النتائج. هل يمكن أن تكون ايجابيات كاذبة؟
6. اختبار ELISA - النتائج. هل يمكن أن تكون سلبية كاذبة؟

اختبار ELISA ، أي مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم ، هو طريقة مخبرية شائعة الاستخدام تخدم ، من بين أمور أخرى ، للكشف الكمي عن الأجسام المضادة في الدم.

لهذا السبب ، وجد اختبار ELISA تطبيقًا في تشخيص الأمراض البكتيرية ، مثل داء لايم.

ميزة طريقة ELISA هي بساطتها وإمكانية التنفيذ السريع بالإضافة إلى الحساسية العالية. يتم تنفيذ طريقة ELISA باستخدام ألواح بلاستيكية خاصة بها آبار مملوءة ببروتينات Borrelia (مستضدات) والأجسام المضادة وحيدة النسيلة المحددة ، والتي تم تصميمها لاكتشاف الأجسام المضادة في عينة المريض.

اختبار ELISA - ماذا يكتشف؟ تطبيق اختبار ELISA

إن الحساسية العالية والبساطة التي تتميز بها طريقة ELISA جعلتها قابلة للتطبيق في تشخيص العديد من الأمراض ، ولكن اشتهرت بأنها طريقة تشخيص مرض لايم.

في حالة تشخيص داء لايم ، فإن ما يسمى ب ELISA غير المباشر ، والذي يسمح باكتشاف IgM أو IgG في المادة المختبرة. بنفس الطريقة ، يمكن اكتشاف الأجسام المضادة للتشخيص:

• الالتهابات الفيروسية: فيروسات الهربس (الهربس ، الهربس النطاقي ، إبشتاين بار ، الفيروس المضخم للخلايا) ، فيروس نقص المناعة البشرية ، فيروسات التهاب الكبد (HBV و HCV)
• عدوى البروتوزوا: داء المقوسات ، الجيارديا
• أمراض المناعة الذاتية: مرض الاضطرابات الهضمية (الأجسام المضادة لـ tTG أو مضادات DPG) ، ومرض هاشيموتو (الأجسام المضادة لـ TG ومضادة TPO) ، وأمراض الأمعاء الالتهابية (مضادات ASCA والأجسام المضادة لـ ANCA)
• الأمراض الطفيلية والحساسية التي يتم فيها اكتشاف الأجسام المضادة IgE المحددة. قد يشير المستوى المتزايد لديهم إلى وجود حساسية ، على سبيل المثال لحبوب اللقاح والطعام ، أو الإصابة الطفيلية (الدودة الشريطية المسلحة ، الدودة البشرية المستديرة)

هناك أيضًا تعديلات على طريقة ELISA (ما يسمى ساندويتش ELISA) ، والتي تسمح باكتشاف عينة من البروتينات بخلاف الأجسام المضادة. ثم الهدف من الاختبار هو الكشف في المادة البيولوجية:

• شظايا من الفيروسات أو البكتيريا ، وغالبًا ما تكون مستضدات مميزة لممرض معين
• هرمونات المصل ، مثل هرمون الاستروجين والبرولاكتين و TSH و fT4 والكورتيزول
• الإنزيمات ، مثل كالبروتكتين ، إيلاستاز البنكرياس ، فوسفاتيز قلوي
• علامات الورم ، مثل CA-125
• وجود أدوية في المصل

هذه الطريقة قابلة للتطبيق أيضًا في صناعة الأغذية ، حيث يمكنها اكتشاف آثار مسببات الحساسية (مثل الحليب والفول السوداني) والكائنات المعدلة وراثيًا أو السموم في الطعام.

اقرأ أيضًا: الأجسام المضادة لـ TPO - القاعدة. كيف تفسر نتائج الاختبار؟ ما هي الأجسام المضادة للأعصاب؟ ما هي الأمراض التي يشيرون إليها؟ الأجسام المضادة وحيدة النسيلة

اختبار ELISA - ما هو؟

يتم تشخيص داء لايم على سبيل المثال باستخدام طريقة ELISA في اكتشاف البروتينات المناعية في المواد البيولوجية - الأجسام المضادة التي تنشأ أثناء الاستجابة ضد مستضدات بوريليا.

يتم اختبار الأجسام المضادة في فئتين ، IgM و IgG. IgMs هي الأجسام المضادة الأولى التي تظهر في الجسم عند ملامستها للبكتيريا ، وهي تتراجع بمرور الوقت.

يتم أخذ مكانها بواسطة الأجسام المضادة IgG الأكثر ثباتًا والتي يمكن أن تبقى في الجسم لعدة عشرات من السنين.

بهذه الطريقة ، يتم اختبار وجود البكتيريا في الجسم بشكل غير مباشر عن طريق الكشف عن الأجسام المضادة الموجهة بشكل خاص ضد Borrelia spirochetes.

قد يتم توجيه الأجسام المضادة في مراحل مختلفة من العدوى ضد مجموعة متنوعة من بروتينات بوريليا. على سبيل المثال ، في مرحلة مبكرة هو بروتين p41.

في المراحل اللاحقة ، يبدأ المزيد والمزيد من البروتينات في الظهور ، مثل p21 ، p30 ، p39 ، p43. هذا هو سبب صعوبة تشخيص داء لايم.

يعد اختيار البروتينات البكتيرية أمرًا مهمًا للغاية حتى يكون للاختبار قيمة تشخيصية عالية. لذلك ، بشكل روتيني في تشخيص مرض لايم ، يجب استخدام اختبارات ELISA من الجيل الثاني أو الجيل الثالث ، حيث يتم اختيار مجموعات البروتينات للحصول على النتيجة الأكثر موثوقية.

اختبار ELISA ومرض لايم. متى تفعل؟

داء لايم مرض جرثومي تسببه بكتيريا بوريليا بورجدورفيري وأنواعها المتعددة.

تشخيص المرض ليس سهلاً بسبب تعقيد الاستجابة المناعية ضد بوريليا والعيوب في الأساليب المختبرية.

الطريقة المختبرية الأكثر شيوعًا هي طريقة ELISA شديدة الحساسية ، والتي تكتشف الأجسام المضادة المحددة التي ترفع ضد البروتينات البكتيرية.

في تشخيص داء لايم ، يتم استخدام طريقة ELISA غير المباشرة والتي يتم فيها تمييز المراحل التالية:

• حضانة الآبار على الصفيحة بالمواد التي تم جمعها من المريض ، مثل المصل. إذا كانت هناك أجسام مضادة ضد Borrelia في المادة المختبرة ، فإنها ترتبط بالبروتينات في قاع التفاعل جيدًا
• ثم يتم شطف المصل الزائد بسائل غسيل خاص (عازلة) وما يسمى متقارن ، وهو جسم مضاد مرتبط بالإنزيم الذي يرتبط بالأجسام المضادة المرتبطة سابقًا في آبار التفاعل
• ثم يضاف الركيزة للمقارن ويحدث تفاعل لوني (نتيجة إيجابية) أو لا يوجد تفاعل لوني (نتيجة سلبية)
• الخطوة الأخيرة هي قراءة القارئ (مقياس الطيف الضوئي) لتركيز الأجسام المضادة ضد Borrelia في مصل المريض

يتم إجراء اختبار ELISA لمرض لايم من الدم ، وفي حالة الأعراض العصبية (داء العصبونات) ، وكذلك من السائل النخاعي.

لا ينبغي اختبار السائل الزليلي حيث توجد احتمالية كبيرة لنتائج إيجابية خاطئة.

أساس تشخيص المرض الأعراض السريرية التي تدل عليه ، والتي تؤكدها نتائج الفحوصات المخبرية.

لا تسمح إضافة نتيجة اختبار معملية بدون أعراض بتشخيص مرض لايم ، حيث ثبت أن الأجسام المضادة ضد بوريليا يتم اكتشافها أيضًا لدى الأشخاص الأصحاء.

يبدأ التشخيص المصلي لمرض لايم باختبار فحص شبه كمي لـ ELISA. إذا كانت النتيجة سلبية ، فهذا يعني أنه لم يتم اكتشاف أي نوع من اللولبيات Borrelia أو أن النتيجة سلبية كاذبة.

إذا كانت النتيجة إيجابية أو إيجابية بشكل ضعيف (ملتبس) ، فيجب إجراء اختبار التأكيدي لطخة غربية ، والذي يتميز بدقة عالية.

هذا لتأكيد أن نتائج ELISA "صحيحة". أثناء التشخيص ، لا يمكنك تخطي أي من الخطوات المذكورة أعلاه ، على سبيل المثال ، إجراء التشخيص باستخدام طريقة اللطخة الغربية على الفور أو إجراء التشخيص بناءً على نتيجة ELISA الإيجابية وحدها.

في بولندا ، غالبًا ما ينتهي تشخيص مرض لايم في مرحلة الفحص الأولى ، مما يتسبب في سوء تفسير النتائج الإيجابية أو الإيجابية الضعيفة.

مقال موصى به:

اختبار تحول الخلايا الليمفاوية (LTT) من المفيد أن تعرف

اختبار ELISA - السعر. كم تكلفة اختبار ELISA؟

يكلف الاختبار حوالي 60 زلوتي بولندي ويتم إجراؤه على الفور. ومع ذلك ، يمكنك الانتظار حوالي ثلاثة أشهر للحصول على نتائج الإحالة.

اختبار ELISA - النتائج. هل يمكن أن تكون ايجابيات كاذبة؟

تنتج النتائج الإيجابية الكاذبة عن التفاعل التبادلي للأجسام المضادة IgM مع البروتينات الأخرى. قد تتعرف الأجسام المضادة التي ينتجها الجسم بشكل غير صحيح على مستضد من كائنات دقيقة أخرى مثل مستضد بوريليا.

تحدث "الأخطاء" الأكثر شيوعًا عند الأشخاص المصابين بالتهاب اللولبية الشاحبة وفيروسات الهربس والأشخاص المصابين بالذئبة الحمامية الجهازية وأمراض الروماتيزم الأخرى.

اختبار ELISA - النتائج. هل يمكن أن تكون سلبية كاذبة؟

قد تظهر نتائج سلبية كاذبة في مرحلة مبكرة من الإصابة ، وفي هذه الحالة يجب إعادة الاختبار بعد حوالي 3-4 أسابيع. هذا يسمي النافذة المصلية ، وهي الفترة الأولية للعدوى التي لم "يتمكن" الجسم بعد من إنتاج أجسام مضادة محددة.

وبالمثل ، في الأشخاص الذين يعانون من نقص المناعة الذين لا ينتجون ما يكفي من الأجسام المضادة.

مشكلة كبيرة ، خاصة في الالتهابات الشديدة للغاية ، هي ظهور ما يسمى المجمعات المناعية التي تتكون من مستضدات Borrelia spirochetes وأجسام مضادة محددة لها.

ونتيجة لذلك ، تصبح الأجسام المضادة "غير مرئية" للطرق الشائعة الاستخدام مثل ELISA ، وعلى الرغم من وجودها في المادة المختبرة ، إلا أنه لا يمكن اكتشافها.

في مثل هذه الحالات ، قد يستخدم المختبر تحطيم المجمعات المناعية. تم تصميم هذا العلاج لإطلاق الأجسام المضادة. ومع ذلك ، لا يتم استخدام هذه الطريقة على نطاق واسع بسبب نقص التوحيد القياسي في المختبرات.

يستحق المعرفة

لماذا تشخيص مرض لايم ليس بالأمر السهل؟

هذا يرجع إلى تعقيد الاستجابة المناعية ضد بوريليا والقيود المفروضة على الأساليب المختبرية. إن تنوع الأصناف وظهور أنواع جديدة تسبب العدوى ، خاصة في القارة الأوروبية ، لا يسهل تطوير طرق التشخيص الفعالة.

ظهرت المزيد من الأصناف مؤخرًا في أوروبا ، مثل Borrelia bissetii و Borrelia valaisiana و Borrelia spielmanii. بالإضافة إلى ذلك ، في الجسم ، يمكن أن تتحول Borrelia spirochetes إلى خراجات أو البقاء في أماكن من الجسم يتعذر الوصول إليها لخلايا جهاز المناعة.

أن تكون بالتالي "غير مرئي" لجهاز المناعة. بالإضافة إلى ذلك ، فقد ثبت أن الأنسجة قد تحتوي على أجزاء من البكتيريا لها خصائص قوية تحفز الالتهابات. يُعتقد أنها مسؤولة عن الأعراض المزمنة لمرض لايم ، على الرغم من نتائج الاختبارات المعملية السلبية.

المؤلفات

1. Witecka-Knysz E. et al. مرض لايم: لماذا يصعب التشخيص؟ طبيب التشخيص المخبري أبريل 2007.
2. مور إيه وآخرون.المبادئ التوجيهية الحالية ، والمخاطر السريرية الشائعة ، والتوجيهات المستقبلية للتشخيص المختبري لمرض لايم ، الولايات المتحدة. Emerg تصيب ديس. 2016 يوليو ؛ 22 (7).
3. التشخيص المختبري للأمراض التي تنقلها القراد. توصيات الفريق العامل: الغرفة الوطنية لأخصائيي التشخيص المختبرين ، المعهد الوطني للصحة العامة - المعهد الوطني للصحة ، مستشار وطني في مجال الأمراض المعدية ، قسم الأمراض المعدية والعدوى العصبية ، جامعة بياليستوك الطبية ، الجمعية البولندية لعلم الفيروسات ، وارسو 2014
4. Hosseini S. et al.: مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA) من الألف إلى الياء Springer 2017.

عن المؤلف

كارولينا كارابين ، دكتوراه في الطب ، دكتوراه ، عالمة الأحياء الجزيئية ، تشخيص المختبر ، Cambridge Diagnostics Polska تدربت كعالمة أحياء مع تخصص في علم الأحياء الدقيقة والتشخيص المخبري مع أكثر من 10 سنوات من الخبرة في العمل المخبري. خريج كلية الطب الجزيئي وعضو في الجمعية البولندية لعلم الوراثة البشرية. رئيس المنح البحثية في مختبر التشخيص الجزيئي في قسم أمراض الدم والأورام والأمراض الباطنية في جامعة وارسو الطبية. دافعت عن لقب دكتور في العلوم الطبية في مجال البيولوجيا الطبية في كلية الطب الأولى في جامعة الطب في وارسو. مؤلف للعديد من العلوم العلمية والشعبية يعمل في مجال التشخيص المختبري والبيولوجيا الجزيئية والتغذية. بشكل يومي ، بصفته متخصصًا في مجال التشخيص المختبري ، يدير القسم الفني في Cambridge Diagnostics Polska ويتعاون مع فريق من خبراء التغذية في عيادة CD الغذائية. يشارك معرفته العملية في التشخيص والعلاج الغذائي للأمراض مع المتخصصين في المؤتمرات والجلسات التدريبية والمجلات والمواقع الإلكترونية. وهي مهتمة بشكل خاص بتأثير نمط الحياة الحديث على العمليات الجزيئية في الجسم.